實驗目的

　　1．掌握FISH技術的一般原理，及其基本實驗方法；　

　　2．了解FISH技術的發展概況，以及應用范圍。

實驗原理

FISH是以分子雜交為基礎，應用非放射性熒光物質標記核酸探針，通過堿基互補的原理與靶DNA雜交，在核中或染色體上顯示靶DNA序列位置的方法。FISH技術可分為四個步驟：樣品制備、探針標記、雜交及其檢測。

實驗準備

　　1．材料染色體標本或血涂片

　　2．儀器低溫高速離心機、熒光顯微鏡、VELP漩渦混勻器、移液器、恒溫水浴鍋、培養箱、烤箱

實驗方法與步驟　　

　　 1．探針混合與變性

　?。?）混合20～60ng標記探針DNA和3～5μg鮭精DNA。反應后體積少于10μl，可直接凍干；若體積較大，可加1/20體積的3mol/L乙酸鈉和2倍體積100%乙醇沉淀DNA。混勻并于-70℃30min。在4℃，12000r/min離心10min，棄上清，沉淀物以300μl70%乙醇洗滌后在離心（同上），棄上清，凍干。

　?。?）將DNA重懸于5μl去離子的甲酰胺中，室溫旋渦混勻3min。

　?。?）加入5μl雜交緩沖液，漩渦混勻器中混勻5min。

　?。?）將DNA探針置于75℃水浴中變性5min。迅速置于冰浴中5min，備用?！?/p>

　　 2．樣本處理

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